Tout commence lorsque Chuck Bartowski, jeune informaticien sans histoire, reçoit un mail de son ancien camarade à l'Université de Stanford, Bryce Larkin, qui contient tous les secrets des agences d'espionnage américaines. Sans le vouloir, il assimile toutes ces données dans son inconscient,, devenant ainsi l'Intersect, sorte de super-ordinateur humain. Débarquent alors deux espions qui seront chargés de le protéger : John Casey de la NSA, et surtout la belle Sarah Walker de la CIA. Chuck doit alors apprendre à mener de front deux vies totalement différentes : celle d'un geek tout ce qu'il y a de plus normal aux yeux du monde, et celle d'un super agent travaillant pour le gouvernement, ce qu'il ne peut révéler à personne...
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La deuxième saison continue à se concentrer sur la lutte de Chuck pour maintenir sa vie personnelle et sa vie d'espion séparées, alors qu'il commence peu à peu à se faire à sa nouvelle existence. On y apprend plus sur les origines de l'Intersect, alors que la menace de l'organisation Fulcrum, qui convoite celui-ci, se fait de plus en plus pressante. Dans le même temps, Chuck et Sarah continuent de se rapprocher, leur relation se faisant de plus en plus complexe, au point de mettre en péril la cohésion de l'équipe...
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La saison 3 (en cours de diffusion aux Etats-Unis) continue de suivre l'évolution de Chuck sur la voie pour devenir un véritable espion. Après avoir intégré les données de l'Intersect construit par Fulcrum, il devient une sorte de Chuck "2.0", ses flashes lui permettant désormais d'acquérir des capacités telles que les arts martiaux ou encore un maniement pointu des armes, un atout non négligeable alors que l'organisation "Ring" prend de plus en plus d'ampleur. Un nouvel agent va faire son arrivée dans la Team Bartowski, alors que les relations entre notre héros et Sarah deviennent de plus en plus compliquées...
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